Robert Francis Prevost rođen je 14. rujna 1955. u Chicagu, Illinois, kao sin oca Louisa Mariusa Prevosta, francuskoga i talijanskoga podrijetla i majke Mildred Martínez, španjolskoga podrijetla. Ima dva brata, Louisa Martína i Johna Josepha.
Djetinjstvo i adolescenciju proveo je s obitelji i studirao je prvo u Malom sjemeništu augustinskih otaca, a zatim na Sveučilištu Villanova u Pennsylvaniji, gdje je 1977. godine stekao diplomu iz matematike. U novicijat redovnika augustinaca u provinciji Naše Gospe od dobroga savjeta u Saint Louisu stupio je 1977., a 29. kolovoza 1981. položio je svečane zavjete.
Teološko obrazovanje stekao je na Katoličkom teološkom učilištu u Chicagu. U dobi od 27 godina, njegovi su ga poglavari poslali u Rim na studij kanonskoga prava na Papinskom sveučilištu svetoga Tome Akvinskog (Angelicum).
U Rimu ga je za svećenika 19. lipnja 1982. u Augustinskom kolegiju svete Monike zaredio nadbiskup Jean Jadot, tadašnji propredsjednik Tajništva za nekršćane, koje je kasnije postalo Papinsko vijeće za međureligijski dijalog, a zatim Dikasterij za međureligijski dijalog.
Licencijat je stekao 1984. godine, a sljedeće godine, dok je pripremao doktorsku disertaciju, poslan je u augustinsku misiju u Chulucanasu, Piura, Peru, gdje je ostao do 1986. Godine 1987. obranio je doktorsku disertaciju s temom »Uloga mjesnog priora u redu Svetoga Augustina«. Iste je godine imenovan ravnateljem za zvanja i ravnateljem misija augustinske provincije Majke dobroga savjeta u Olympia Fieldsu u Illinoisu.
Misija u Peruu
Misiji u Trujillu, također u Peruu, kao voditelj zajedničkoga projekta formacije za augustinske kandidate iz vikarijata Chulucanas, Iquitos i Apurímac pridružio se 1988. Tijekom jedanaest godina služio je kao prior zajednice (1988. – 1992.), kao voditelj formacije (1988. – 1998.) i instruktor za zavjetovane članove (1992. – 1998.). U Nadbiskupiji Trujillo služio je kao sudski vikar (1989. – 1998.) i profesor kanonskog prava, patristike i moralne teologije u Velikom sjemeništu »San Carlos y San Marcelo«. Također je bio zadužen i za pastoralnu skrb za Gospu Majku Crkve, kasnije osnovanu kao župa svete Rite (1988. – 1999.), u siromašnom predgrađu grada, te je bio upravitelj župe Gospe od Monserrata od 1992. do 1999.
Godine 1999. izabran je za provincijalnoga priora augustinske provincije Majke dobroga savjeta u Chicagu, a dvije i pol godine kasnije, redovni generalni kapitul Reda svetoga Augustina izabrao ga je za generalnoga priora, potvrdivši ga 2007. za drugi mandat.
U listopadu 2013. vratio se u svoju augustinsku provinciju u Chicagu, služeći kao ravnatelj formacije u samostanu svetoga Augustina, prvi savjetnik i provincijski vikar – dužnosti koje je obnašao sve dok ga papa Franjo 3. studenoga 2014. nije imenovao apostolskim upraviteljem peruanske biskupije Chiclayo, uzdižući ga na biskupsko dostojanstvo titularnog biskupa Sufara. Kanonsko upravljanje biskupijom preuzeo je 7. studenoga iste godine u nazočnosti apostolskoga nuncija Jamesa Patricka Greena koji ga je i zaredio za biskupa 12. prosinca. na blagdan Gospe Guadalupske. Njegovo biskupsko geslo je »In Illo uno unum« (»U njemu samom, jedni«) – riječi svetoga Augustina.
Biskup Chiclaya u Peruu, od 2015. do 2023.
Papa Franjo imenovao ga je 26. rujna 2015. biskupom Chiclaya. U ožujku 2018. izabran je za drugoga potpredsjednika Peruanske biskupske konferencije, gdje je također služio kao član Ekonomskoga vijeća i predsjednik Komisije za kulturu i obrazovanje.
Članom Kongregacije za kler imenovan je 2019., a 2020. godine članom Kongregacije za biskupe. U međuvremenu, 15. travnja 2020. godine, imenovan je i apostolskim upraviteljem peruanske biskupije Callao.
Prefekt Dikasterija za biskupe i kardinal
Dana 30. siječnja 2023. papa Franjo imenovao ga prefektom Dikasterija za biskupe i predsjednikom Papinske komisije za Latinsku Ameriku. Kao voditelj Dikasterija sudjelovao je na Papinim posljednjim apostolskim putovanjima te na prvoj i drugoj sjednici 16. redovne opće skupštine Biskupske sinode o sinodnosti. Kardinalom je imenovan na konzistoriju 30. rujna 2023. godine.
Članom Dikasterija za evangelizaciju te Papinske komisije za Državu Vatikanski Grad papa Franjo imenovao ga je 4. listopada 2023. Dana 6. veljače 2025. papa Franjo ga je promovirao u kardinala-biskupa, imenovavši ga titularnim biskupom Prigradske biskupije Albano.
Za poglavara Katoličke Crkve izabran u četvrtom krugu glasovanja u četvrtak 8. svibnja 2025. i uzeo je ime Lav XIV. (Vatican News)